小鼠瘦素检测试剂盒是用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
小鼠瘦素检测试剂盒的操作流程：
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃，包被过夜。
(3)洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去)，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
(6)洗板，同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
(9)洗板，同(4)。
(10)每孔加TMB显色液100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl2mol/LH2SO4终止反应。
(12)分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，最终测得的OD值为两者之差(W1-W2)，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理：在得出标本(S)和阴性对照(N)的OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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