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鸡透明质酸检测试剂盒的使用步骤和方法

发布时间: 2022-11-12  点击次数: 138次
  鸡透明质酸检测试剂盒的使用步骤和方法:
  一、样品DNA的制备
  用自选方法提取待测样品的总DNA。注意:待测样品的DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA,后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
  二、制备TB基因标准曲线
  (以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或鸡透明质酸检测试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
  1.标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2和1号。
  2.用带芯枪头分别加入45μL超纯水(建议用带芯枪头,下同)。
  3.先将鸡透明质酸检测试剂盒提供的阳性对照用超纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL(注:请不要将鸡透明质酸检测试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL,建议每次稀释10倍剃度稀释,梯度稀释至10E7拷贝/μL)。
  4.在6号管中加入5μL10E7拷贝/μL的TB阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得10E6拷贝/μL的TB阳性对照。
  5.换枪头,从6号管中取5μL溶液到5号管中,充分震荡1分钟,得10E5拷贝/μL的TB阳性对照。
  6.换枪头,从5号管中取5μL溶液到4号管中,得10E4拷贝/μL的TB阳性对照。
  7.重复上面的操作直到得到从10E6拷贝/μL到10E1拷贝/μL6个稀释度的TB阳性对照。
  8.NC管中不加任何阳性对照。
  9.从1-6号管中分别取5μL和待测样品一起进行定量PCR(见下步),每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCRCt值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
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