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犬骨保护素(OPG)酶联免疫吸附测定试剂盒

犬骨保护素(OPG)酶联免疫吸附测定试剂盒

简要描述:产品名称:犬骨保护素(OPG)酶联免疫吸附测定试剂盒
成分:酶标板、试剂、标准品等
规格:48T/96T
保存条件:2~8℃,温度6摄氏度,有效期6个月
服务:免费代测
精准度:高

产品型号: LB-4062833

所属分类:其它ELISA试剂盒

更新时间:2022-05-01

厂商性质:生产厂家

详情介绍

犬骨保护素(OPG)酶联免疫吸附测定试剂盒

试验原理

试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

自备材料

1. 蒸馏水。

2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3. 振荡器及磁力搅拌器等。

犬骨保护素(OPG)酶联免疫吸附测定试剂盒

正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

实验条件的选择

在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:

(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。

(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。

(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。

进口分装:

检测范围和灵敏度不同,用量少时,可使用分装,前期是它的长久性不是很好。

试剂盒的标准曲线最高点OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。

试剂盒的标准曲线相关系数R≥0.98。

试剂盒重复性好,板内、板间变异系数均<9 %。

试剂的组份都多给20%的富余量,确保完成48/96孔的检测,避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。

检测抗体及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作,保证实验结果的重复性。





































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