免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料,如抗原抗体,酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现。
山羊骨成型蛋白4(BMP-4)吸附试剂盒
在进行酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)实验中,有很多需要注意的地方,由于ELISA方法广泛应用在各种抗原和抗体的此定中。但是测定中的影响因素很多,并且对操作有较高的要求,所以,在实验中除了正常的相互反应,还会出现错误的反应,导致错误的结果。
而造成这种错误的可能因素有:标本因素;试剂因素;操作因素等。
为此,上海劲马针对常见问题做分析如下:这里我简单的总结一下:
ELISA 试剂盒标准操作要点
无论在什么研究中,优质的试剂、良好的和正确的操作是保证ELISA 检测结果准确可靠的必要条件。ELISA 中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的纯化水电导率小于1.5μs/cm。
A 标本的采取和保存
大部分ELISA 检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP 为标记的ELISA 测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。一般说来,在5 天内测定的血清标本可放置于4℃,标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合,使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。
保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。