山羊胰岛素(INS)酶联免疫吸附测定试剂盒 |
免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料,如抗原抗体,酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现。
山羊胰岛素(INS)酶联免疫吸附测定试剂盒 |
在进行酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)实验中,有很多需要注意的地方,由于ELISA方法广泛应用在各种抗原和抗体的此定中。但是测定中的影响因素很多,并且对操作有较高的要求,所以,在实验中除了正常的相互反应,还会出现错误的反应,导致错误的结果。
而造成这种错误的可能因素有:标本因素;试剂因素;操作因素等。
为此,上海劲马针对常见问题做分析如下:这里我简单的总结一下:
ELISA 试剂盒标准操作要点
无论在什么研究中,优质的试剂、良好的和正确的操作是保证ELISA 检测结果准确可靠的必要条件。ELISA 中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的纯化水电导率小于1.5μs/cm。
样品活化方法
生物样品中的通常以无活性的形式存在,在检测指标活性前必须进行活化处理。
活化方法如下:
血清、血浆: 280 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了10倍!
细胞培养上清:20 μL标准品&样品稀释液中加入100 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了2倍!
组织匀浆:1960 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀后检测。
注意:样品被稀释了50倍!
精密度
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
批内变异系数 | 批间变异系数 | |||||
样本 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
数量 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
平均值( MERGEFIELD 单位ng/mL) | 0.41 | 1.07 | 4.96 | 0.47 | 1.25 | 4.24 |
标准差 | 0.02 | 0.05 | 0.22 | 0.03 | 0.06 | 0.2 |
变异系数 (%) | 4.88 | 4.67 | 4.43 | 6.38 | 4.8 | 4.72 |
回收率
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
样本类型 | 回收率范围 (%) | 平均回收率 (%) |
血清(n=5) | 94-110 | 102 |
血浆(EDTA)(n=5) | 90-102 | 96 |
细胞上清(n=5) | 95-106 | 98 |
线性
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
血清(n=5) | 血浆(EDTA)(n=5) | 细胞上清(n=5) | ||
1:2 | 回收率范围(%) | 99-108 | 95-105 | 92-104 |
平均回收率(%) | 105 | 102 | 97 | |
1:4 | 回收率范围(%) | 95-109 | 90-100 | 97-105 |
平均回收率(%) | 102 | 96 | 100 | |
1:8 | 回收率范围(%) | 89-103 | 89-104 | 96-108 |
平均回收率(%) | 97 | 97 | 102 | |
1:16 | 回收率范围(%) | 88-102 | 98-108 | 92-105 |
平均回收率(%) | 94 | 104 | 100 |
试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在4℃保存一周;如果一周以后才使用试剂盒,请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 |
说明书 | 1份 | 1份 |
封板膜 | 2片 | 2片 |
密封袋 | 1个 | 1个 |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 |
标准品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 |
酶标试剂 | 5 ml×1瓶 | 10 ml×1瓶 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 |
终止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 |
20×浓缩洗涤液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 |
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 |
说明书 | 1份 | 1份 |
封板膜 | 2片 | 2片 |
密封袋 | 1个 | 1个 |