人一氧化碳血红蛋白（HbCO）检测试剂盒

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/L，15 ng/L)。

2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置38℃温育30分钟。

4. 配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6． 底物请避光保存。

7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9． 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标， 在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%

1.试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

特异性：Hu IL-1a，检测范围：3.9pg/ml~250pg/ml，灵敏度：2pg/ml，标本用量：100ul/well。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法的原理制备，适用于体外定量检测人血清、血浆、组织、体液或细胞培养上清液中的天然和重组的IL-1a浓度。白介素-1（IL-1）是IL-1α和IL-1β两种蛋白的统称，是由不同基因编码的，但它们识别细胞表面相同的受体。IL-1α和IL-1β结构相似，在氨基酸水平上有25%的同源性；两种都是由分子量31kDa前体裂解成17.5kDa的蛋白质。IL-1α和IL-1β都不包含典型的疏水信号肽，但是有证据证明一些非典型路径可以分泌这些因子。大量的IL-1α以前体形式保留在胞内。一部分未修饰的IL-1α运输到细胞表面但仍与细胞相连。未修饰的膜结合IL-1α体现生物活性，邻近的细胞旁分泌IL-1。IL-1α和IL-1β与特定的受体结合后发挥其作用。

特异性：Human IL-2，检测范围：7.8pg/ml~500pg/ml，高灵敏度：4pg/ml，高特异性：不与IL-1,3,4,5,6,8,10,12,IFN,TNF,VEGF,TGF及ICAM等反应，高重复性：板内、板间变异系数均<10%，标本用量：100ul/well。本实验采用双抗体夹心ELISA法，适用于体外定量检测人血清、血浆、组织或细胞培养上清液中天然和重组的IL-2浓度。白介素2(IL-2)主要由丝裂原或抗原激活的T淋巴细胞表达的。它在促进抗原特异性增殖的T细胞克隆增殖中起重要作用。另外，IL-2也参与其他不同种类细胞的多个免疫反应。IL-2刺激胸腺细胞增殖；刺激激活的B细胞增殖与分化；促进单核细胞的生长、分化与细胞杀伤能力；诱导自然杀伤细胞的生长与刺激这些细胞的细胞因子表达以及细胞杀伤能力；增加淋巴激活杀伤细胞(LAK)的产生；诱导少突胶质细胞的增殖与分化。人IL-2的cDNA编码153个氨基酸糖蛋白前体包含20个氨基酸组成的信号肽，成熟时信号肽被剪切掉。在氨基酸水平序列上，小鼠IL-2与人IL-2的序列同源性达60%。人IL-2可以在小鼠细胞中活化，但是小鼠IL-2不能在人细胞中活化。IL-2基因定位在染色体4q位点。

特异性：Hu IL-2sRa，检测范围：62.5pg/ml~4000pg/ml，灵敏度：30pg/ml，标本用量：100ul/well。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法的原理制备，适用于体外定量检测人血清、血浆、组织、体液或细胞培养上清液中的天然和重组的IL-2sRa浓度。白介素2（IL-2）是通过结合多分子细胞受体复合物发挥生物活力的。多年来，这个受体复合物被认为是由IL-2Rα与IL-2β两个糖蛋白链组成的，两个亚基相互结合在一起形成一个高亲和力受体来传递IL-2信号的。IL-2Rα（也称为Tac抗原或CD25），是一个分子量为55kD跨膜糖蛋白，有351个氨基酸组成。IL-2β在1989年被克隆出来，它是个由575个氨基酸组成的跨膜糖蛋白，分子量为75kD，其中有286个氨基酸位于胞浆内，更显著地参与了细胞信号传导作用。常认为它是IL-2一种弱抑制剂。在任何情况下，体液中增高的可溶性IL-2Rα常伴随这T细胞与B细胞的增加与免疫系统的激活。